คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การโคลนยีน EPSPS และผลิตแอนติบอดีในระบบเซลล์แบคทีเรีย เพื่อผลิตชุดตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรม (Roundup Ready)

คำหลัก : การโคลนยีน EPSPS

ผู้วิจัย : ขนิษฐา วงศ์วัฒนารัตน์

ผู้ร่วมวิจัย : ศรีเมฆ ชาวโพงพาง, ประเสริฐ วงศ์วัฒนารัตน์, วันเพ็ญ ศรีทองชัย, สุรภี กีระติยะอังกูร, กิ่งกาญจน์ พิชญกุล และอลงกรณ์ กรณ์ทอง

หน่วยงาน : สำนักวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพ คณะเกษตร มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ (ศูนย์รังสิต) สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช และสำนักผู้เชี่ยวชาญ กรมวิชาการเกษตร

ปี: 2553

ประเภทผลงาน: รายงานความก้าวหน้า

จำนวนผู้อ่าน: 33 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          งานวิจัยการโคลนยีน EPSPS และผลิตแอนติบอดีในระบบเซลล์แบคทีเรีย เพื่อผลิตชุดตรวจสอบถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรมต้านทานสารกำจัดวัชพืชไกลดฟเสท (Roundup Ready) เริ่มจาการเพิ่มปริมาณยีน EPSPS จากดีเอ็นเอของถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรมต้านทานสารกำจัดวัชพืชไกลโฟเสทด้วยคู่ primers จำเพาะ EPSPS 1 และ EPSPS 2 ได้ชิ้นดีเอ็นเอขนาด 1,368 bp แปลเป็นลำดับกรดอะมิโนพบว่า มีความยาว 455 กรดอะมิโน เมื่อนำชิ้นดีเอ็นเอ EPSPS เชื่อมต่อเข้าไปยัง Expression vector (pET200 TOPO) แล้วถ่ายฝากเข้าไปในเซลล์แบคทีเรีย escherichia coli BL21 นำมาเลี้ยงเพิ่มปริมาณในอาหารเหลว 2xYT ที่มีกานามัยซินผสมอยู่ชักนำให้สร้างโปรตีนด้วยการเติมสาร IPTG เข้มข้น 1 mM ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 0, 2, 4, 6, 12, 18, 24 และ 36 ชั่วโมง พบว่าระยะเวลา 24 ชั่วโมง เป็นเวลาที่มีการเพิ่มปริมาณโปรตีนสูงสุด แล้วนำมาแยกสกัดโปรตีนให้บริสุทธิ์ด้วย column Ni-NTP Superflow ผลการตรวจหาความเข้มข้นโปรตีนที่แยกได้ด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่ามีขนาดของโปรตีนประมาณ 52 กิโลดาลตัน นำโปรตีนบริสุทธิ์ไปใช้ในเป็นแอนติเจนในการผลิต Polyclonal antibody ในกระต่าย แล้วสกัด IgG ให้บริสุทธิ์ พบว่าความเข้มข้นที่เหมาะสมของ IgG ในการตรวจโปรตีน EPSPS และถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรม Roundup Ready ด้วยวิธี Dot immunoblinding assay (DIBA) คือ 2 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ IgG ที่ผลิตได้สามารถตรวจโปรตีน EPSPS ได้ปริมาณต่ำสุด 1 นาโนกรัม/มิลลิลิตร หลังจากนั้นนำ IgG มาประกอบเป็นชุดตรวจสอบแบบ Gold Lateral Immuno Flow Test (GLIFT kit) สามารถตรวจสารละลายโปรตีน EPSPS ความเข้มข้น 100 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร จะเกิดปฏิกิริยาสีม่วง 2 แถบ คือ Test line และ Control line ในขณะที่สารละลายที่ไม่มีโปรตีน EPSPS เกิดปฏิกิริยาสีม่วงแถบเดียวคือ Control line โดยปฏิกิริยาเกิดขึ้นภายใน 5 นาที หลังจากนั้นนำมาตรวจตัวอย่างเมล็ดถั่วเหลืองบดละเอียดที่มีการปนเปื้อนถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรม Roundup Ready พบว่าเกิดปฏิกิริยาภายใน 5 นาที เช่นเดียวกัน

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 16 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 16-08-2563

แจ้งไฟล์หาย