คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การพัฒนาเทคนิค Multiplex Real-time PCR สำหรับตรวจคัดกรองและจำแนกยีนพืชดัดแปลงพันธุกรรมเชิงคุณภาพในพืชนำเข้า (ข้าว ข้าวสาลี ถั่วเหลือง และข้าวโพด)

คำหลัก :

ผู้วิจัย : ปิยรัตน์ ธรรมกิจวัฒน์

ผู้ร่วมวิจัย : ปิยนุช ศรชัย, ฐิติรัตน์ อัศวมงคลศิริ และวีระศักดิ์ พิทักษ์ศฤงคาร

หน่วยงาน :

ปี: 2564

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 56 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          ห้องปฏิบัติการตรวจวิเคราะห์พืชและสินค้าพืชดัดแปลงพันธุกรรมภายใต้การดำเนินงานของกลุ่มวิจัยพัฒนาการตรวจสอบพืชและจุลินทรีย์ดัดแปรพันธุกรรม สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ กรมวิชาการเกษตร ได้รับการรับรองห้องปฏิบัติการตามมาตรฐานสากล ISO/IEC 17025 โดยในปัจจุบันมีการตรวจคัดกรองยีน CaMV35S Promoter, Nos terminator และยีนอ้างอิงพืช ซึ่งเป็นการตรวจคัดกรองเชิงคุณภาพ เพื่อบ่งชี้ถึงการปะปนพืชดัดแปลงพันธุกรรมในตัวอย่างทดสอบ การพัฒนาการตรวจวิเคราะห์พืชหรือสินค้าพืชดัดแปลงพันธุกรรมในข้าว ข้าวสาลี ถั่วเหลือง และข้าวโพด พบว่าวิธีการสกัดดีเอ็นเอด้วยวิธี Genescan Lysis ได้ค่าปริมาณและบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอเพียงพอสำหรับการตรวจวิเคราะห์ด้วยเทคนิค Multiplex Real-time PCR ซึ่งสามารถตรวจคัดกรองและจำแนกแยกข้าวดัดแปลงพันธุกรรมได้ 3 สายพันธุ์ ได้แก่ Bt63, LL601 และ LL62 โดยใช้ชุดไพรเมอร์ 2 ชุด ได้แก่ 1) CaMV35S Promoter, Nos terminator และ PLD 2) P35S::Bar, CryIAb/Ac, LL62 และ
LL601 ในข้าวสาลีสามารถจำแนกได้ 2 สายพันธุ์ ได้แก่ MON71800 และ MON71200 และจำแนกการปะปนพืชดัดแปลงพันธุกรรมอื่น ได้แก่ ถั่วเหลือง ข้าวโพด และ คาโนลา โดยใช้ชุดไพรเมอร์ 2 ชุด ได้แก่ 1) CaMV35S Promoter, Nos terminator, Acc-1 และ MON71800 2) Lectin, HMG, CruA และ MON71200 ในถั่วเหลือง สามารถจำแนกได้ 6 สายพันธุ์ ได้แก่ events A2704-12, MON87701, MON87705, MON87769, MON89788 และ GTS 40-3-2 โดยใช้ชุดไพรเมอร์ 2 ชุด ได้แก่ 1) CaMV35S Promoter, Nos terminator, Cy1Ac และ Lectin 2) rbcS-E9, Mon 87705, Mon 89788 และ Lectin สำหรับข้าวโพดสามารถจำแนกได้ 14 สายพันธุ์ ได้แก่ Bt11, GA21, TC1507, DAS59122-7, T25, MIR604, Mon810, Mon88017, Mon89034, NK603, MIR162, Mon87460, Mon87427, และ DAS40278-9 โดยใช้ชุดไพรเมอร์เพียง 1 ชุด ได้แก่ P35S, Nos, Pat, FMV และ Ubiquitin พบว่าชุดไพรเมอร์ที่ออกแบบและติดฉลากสีมีความจำเพาะกับยีนที่ใช้ตรวจคัดกรองในแต่ละชนิดพืช โดยเมื่อเปรียบเทียบกับการตรวจคัดกรองแบบยีนเดี่ยว พบว่าสามารถลดเวลาการตรวจคัดกรอง โดยใช้ต้นทุนสารเคมีลดลง และจากการทดสอบความใช้ได้เปรียบเทียบระหว่างการตรวจคัดกรองแบบยีนเดี่ยวกับเทคนิค Multiplex Real-time PCR พบว่าเทคนิคที่พัฒนาขึ้น ค่าความถูกต้องของผลการทดสอบ 100 เปอร์เซ็นต์ มีค่าขีดจำกัดของตรวจพบ (LOD) ไม่แตกต่างกันกับการตรวจแบบยีนเดี่ยว นอกจากนั้นยังมีการพัฒนาวัสดุอ้างอิงพลาสมิดของข้าวสาลีดัดแปลงพันธุกรรมสายพันธุ์ MON71800 ขึ้น เพื่อใช้ทดแทนการนำเข้าของวัสดุอ้างอิงทดสอบจากต่างประเทศ

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 25 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 03-02-2568

แจ้งไฟล์หาย