คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การตรวจจับโปรตีน NPTII โดย Polyclonal Antibody ด้วยเทคนิค Surface Plasmon Resonance

คำหลัก :

ผู้วิจัย : พงศกร สรรค์วิทยากุล

ผู้ร่วมวิจัย : ขนิษฐา วงศ์วัฒนารัตน์, ปิยรัตน์ ดนัยสิริชัยชล, ชนันต์ธร ดนัยสิริชัยชล

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

ปี: 2561

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 8 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          การประยุกต์ใช้เทคโนโลยีการตรวจวิเคราะห์ทางชีวโมเลกุลร่วมกับระบบอิเล็กโทรนิควงจรไฟฟ้า (ไบโอเซนเซอร์ for Detection, Lab-on-Chip ) ได้รับความนิยมและพัฒนาขึ้นอย่างมากในทางการแพทย์ในช่วงเวลา 5 ปีที่ผ่านมา คือ เทคนิค Surface Plasmon Resonance หรือปฏิกิริยาการสั่นของอนุภาคควอนตั้มแบบรีโซแนนซ์บนพื้นผิว ซึ่งสามารถตรวจวิเคราะห์หาโมเลกุลหรือโปรตีนชนิดที่จำเพาะเจาะจงและมีปริมาณน้อยมากได้ในงานวิจัยนี้เป็นการนำโปรตีนโอไมซิน ฟอสโฟทรานสเฟอเรส II เป็นโปรตีนที่สังเคราะห์มาจากยีน nptII ซึ่งได้ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการใช้เป็นตัวคัดแยกทางชีวภาพ สำหรับการดัดแปลงพันธุกรรมพืช ในงานวิจัยนี้สามารถผลิต Recombinant โปรตีน NPTII และทำให้บริสุทธิในปริมาณมากได้ในคุณภาพที่อยู่ในระดับดี ซึ่งโปรตีนดังกล่าวสามารถนำไปใช้กระตุ้นในการผลิต Polyclonal antibody และเมื่อนำ Recombinant โปรตีน NPTII มาทดสอบการเชื่อมกับชิป NTA พบว่า HisTag ที่อยู่บน Recombinant โปรตีนสามารถจับกับ Ni2+ ได้เป็น Ligand ที่ใช้ทดสอบการจับกันของโปรตีน NPTII และความสามารถในการจับของ Antibody ซึ่งเมื่อนำ Polyclonal Antibody ที่ทำให้บริสุทธิมาใช้เชื่อมกับโปรตีน A พบว่าโปรตีน A สามารถจับกับ Antibody ที่ผลิตได้ทุกชนิดและเปลี่ยนเป็น Ligand ซึ่งสามารถจับกับ Analyte ซึ่งเป็นโปรตีน NPTIII ได้ และจากการนำ Antibody มาทำปฏิกิริยา Amine coupling เพื่อเชื่อม Antibody แบบถาวรกับชิป CM5 และทดสอบความสามารถในการจับกับโปรตีน NPTII พบว่าที่ pH 4.5 มีการสะสมของ Antibody บนชิปมากที่สุด และเมื่อทดสอบการตรวจวับกับโปรตีน NPTII สามารถตรวจจับกับโปรตีนได้ถึงความเข้มข้นที่ 5 µg/ml หรือ 5 ng/µl แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพของโปรตีนชิปที่สามารถจับกับโมเลกุลเป้าหมายที่ปริมาณต่ำได้เป็นอย่างดีงานวิจัยชิ้นสามารถเป็นต้นแบบในการพัฒนาการตรวจวิเคราะห์โปรตีนปนเปื้อน GM ด้วยเทคนิคที่ง่ายและมีราคาถูกได้

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 3 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 10-06-2568

แจ้งไฟล์หาย