คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การโคลนยีน PIS (Phosphatidyl Inositol (Pdlns) Synthase) ที่มีผลต่อลักษณะทนแล้งในพืชยาสูบ

คำหลัก :

ผู้วิจัย : พยุงศักดิ์ รวยอารี

ผู้ร่วมวิจัย : ภรณี สว่างศรี, บุญเรือนรัตน์ เรืองวิเศษ, สุภาวดี ง้อเหรียญ

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

ปี: 2560

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 23 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          รวบรวมลำดับเบสของยีน PIS (Phosphatidyl (pdlns) Inositol Synthase) จากฐานข้อมูลชีวภาพสากล (NCBI) ออกแบบและสังเคราะห์ยีน PIS ด้วยวิธี GeneArt Gene Synthesis ที่ประกอบด้วย 3 คู่ จุดตัดเอนไซม์ตัดจำเพาะ (restriction enzymes) ที่ปลายด้าน 5’ และ 3’ ได้แก่ XbaI-BamHI, XbaI-EcoRI, และ XbaI-KpnI โคลนยีน PIS ที่สังเคราะห์ได้เข้าสู่ TOPO cloning vector และ pUC19 ทรานส์ฟอร์มเข้าสู่แบคทีเรีย E .coli DH5 alpha เพื่อเพิ่มจำนวน ตรวจสอบความถูกต้องด้วยวิธีการหาลำดับเบส จากนั้นตัดพลาสมิดไบนารีเวคเตอร์ pCAMBIA2300 ที่ประกอบด้วย CaMV35S promoter และ Nos Terminator และ pRI909/pRI910 ที่ประกอบด้วย Nos promoter และ Nos terminator พร้อมด้วยยีน PIS ใน TOPO cloning vector ด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะตามสามคู่จุดตัดเอนไซม์เดียวกัน (compatible restriction sites) ทำการทดลองระหว่างปี 2559 ถึงปี 2560 ที่สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ การเชื่อมต่อยีน PIS เข้ากับ pCAMBIA2300, pRI909, และ pRI910 ทั้งสามคู่จุดตัดเอนไซม์ ด้วย T4 DNA ligase ผลการทดลองพบว่า สามารถสร้างคอนส์ตรักส์ของยีน PIS เข้ากับไบนารีเวคเตอร์ทั้งสามชนิดพลาสมิดได้ อีกทั้ง ทำการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อต้นยาสูบเพื่อเตรียมไว้สำหรับการถ่ายฝากยีนด้วยวิธี Agrobacterium transformation ด้วยอะโกรแบคทีเรียมสายพันธุ์ ELEXTROMAX LBA4404 และเตรียมเชื้ออะโกรแบคทีเรียมตามความเข้มข้นที่แตกต่างกันต่อไป ผลการทดลองการถ่ายฝากยีนในเบื้องต้น ยังไม่ได้ตันยาสูบที่ได้รับการถ่ายฝากยีน อาจต้องมีการปรับสภาวะการทดลองเพื่อให้ได้ต้นยาสูบที่ประกอบด้วยยีน PIS ต่อไป ส่วนการทดลองควบคุม และเพลทอาหารเลี้ยงเชื้อที่ทำการทรานส์ฟอร์เมชั่นด้วยสายพันธุ์ LBA4404 ให้ผล 100 เปอร์เซ็นต์ และได้ต้นต้นยาสูบสมบูรณ์ที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเพื่อใช้ในการถ่ายฝากยีนต่อไป

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 11 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 29-07-2568

แจ้งไฟล์หาย