คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การตรวจสอบการปนเปื้อนของมะละกอดัดแปรพันธุกรรมและผลิตภัณฑ์แปรรูปด้วยเทคนิค Real-time PCR

คำหลัก :

ผู้วิจัย : ธีระ ชูแก้ว

ผู้ร่วมวิจัย : ขนิษฐา วงศ์วัฒนารัตน์, ชนันต์ธร ดนัยสิริชัยชล, ศรีเมฆ ชาวโพงพาง

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ สถาบันวิทยาศาสตร์ข้าวแห่งชาติ มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

ปี: 2560

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 33 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          วิธีการตรวจสอบมะละกอดัดแปรพันธุกรรมทั้งการตรวจสอบเชิงปริมาณและคุณภาพ ส่วนใหญ่เป็นการตรวจสอบโดยใช้ดีเอ็นเอ ซึ่งคุณภาพดีเอ็นเอที่สกัดได้ย่อมส่งผลต่อวิธีการตรวจสอบในขั้นตอนต่อไป การทดลองนี้ศึกษาเปรียบเทียบวิธีการสกัดดีเอ็นเอของตัวอย่างมะละกอและผลิตภัณฑ์มะละกอแปรรูป ได้แก่ ผลมะละกอสุก ผลมะละกอดิบ เมล็ดมะละกอ ใบมะละกอสด ใบชามะละกอ แยมมะละกอ บ๊วยเค็มมะละกอ มะละกออบแห้งและน้ำผลไม้ โดยใช้วิธีการสกัดดีเอ็นเอ 5 วิธี คือ 2%CTAB, Guanidinium-Chloroform, GeneScan, Cell breaking และชุดสกัดดีเอ็นเอสำเร็จรูป (DNeasy mericon Food Kit) เปรียบเทียบผลการสกัดระหว่างดีเอ็นเอที่ผ่านและไม่ผ่านการทำบริสุทธิ์ด้วย Wizard® Miniprep DNA Purification พบว่าตัวอย่างและวิธีการสกัดที่ต้องผ่านการทำบริสุทธิ์ คือ ใบมะละกอสด เมล็ดมะละกอสกัดด้วยวิธี GeneScan ใบชามะละกอสกัดด้วยวิธี 2%CTAB ผลมะละกอดิบสกัดด้วยวิธี Cell breaking ผลมะละกอสุกสกัดด้วยวิธี Guanidinium-Chloroform สำหรับวิธีการสกัดที่เหมาะสมกับตัวอย่าง น้ำผลไม้ มะละกออบแห้ง บ๊วยเค็ม มะละกอ และแยมมะละกอ คือ ใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอสำเร็จรูป และไม่ผ่านการทำบริสุทธิ์ การทดสอบคู่ไพร์เมอร์ที่เหมาะสมสำหรับตรวจสอบยีน Papain endogenous จำนวน 5 คู่ พบว่า ทุกคู่ไพร์เมอร์ให้แถบดีเอ็นเอที่มีความสม่ำเสมอกับตัวอย่างมะละกอและผลิตภัณฑ์มะละกอแปรรูป การพัฒนาและตรวจสอบความใช้ได้ของวิธีการตรวจวิเคราะห์มะละกอสายพันธุ์55-1 และ PRSV-SC ด้วยวิธี Real-time PCR โดยใช้พลาสมิดของ GMOs-Hawaii-C1 และ GMOs-SC-C1 เป็นดีเอ็นเอมาตรฐาน พบว่า ความสัมพันธ์ระหว่างค่าที่อ่านได้จากกราฟความเข้มข้นมาตรฐานกับความเข้มข้นในช่วงที่กำหนดมีความถูกต้องและแม่นยำ สำหรับค่าความแม่น (Accuracy, %Bias) ค่าความเที่ยง (Precision, %RSD) ค่าความสามารถในการวัดซ้ำ (Repeatability, RSDr) และความสามารถในการให้ผลซ้ำ (Reproducibility, RSDR) ของวิธีการตรวจวิเคราะห์มะละกอสายพันธุ์55-1 และ PRSV-SC พบว่า อยู่ในเกณฑ์ที่ยอมรับได้ โดยอยู่ในช่วงค่าไม่เกิน 25% แสดงว่า วิธีทดสอบมีความเหมาะสมและเป็นไปตามที่ข้อกำหนดระบุค่าความเข้มข้นน้อยสุดที่สามารถตรวจพบได้อย่างน่าเชื่อถือ (LOD) และความเข้มข้นน้อยสุดที่สามารถหาปริมาณได้อย่างน่าเชื่อถือ (LOQ) ของการตรวจวิเคราะห์มะละกอทั้ง 2 สายพันธุ์ คือ 12.5 copies และ 125 copies ตามลำดับ

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 10 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 30-07-2568

แจ้งไฟล์หาย