คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การตรวจสอบข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมสายพันธุ์ MON810 และ NK603 ด้วยเทคนิค Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP)

คำหลัก :

ผู้วิจัย : ปิยรัตน์ ธรรมกิจวัฒน์

ผู้ร่วมวิจัย : พงศกร สรรค์วิทยากุล, ปิยนุช ศรชัย, ฐิติรัตน์ อัศวมงคลศิริ

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

ปี: 2560

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 26 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          การตรวจสอบข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมด้วยเทคนิค Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) โดยการตรวจคัดกรองยีน CaMV 35S promoter และ Nos terminator ดัดแปลงวิธีการของ Randhawa et al. (2013) และ Lee et al. (2009) ทดสอบหาสภาวะที่เหมาะสมในการเกิดปฏิกิริยา ปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ อุณหภูมิและเวลาในการทำปฏิกิริยา ทดสอบความจำเพาะและความไว ในการตรวจสอบพืชดัดแปลงพันธุกรรม โดยใช้วัสดุอ้างอิงมาตรฐานข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมสายพันธุ์ต่างๆ และตัวอย่างพืช ได้แก่ ข้าวโพดและมะละกอ ดีเอ็นเอจากตัวอย่างวัสดุอ้างอิงมาตรฐานข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรม สายพันธุ์ Mon810 BT 11 BT176 NK603 MIR604 MIR162 Mon89034 ถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรม GTS40-3-2 สกัดวิธี GeneScan ตัวอย่างพืชสด ข้าวโพด มะละกอ และเฟื่องฟ้า ใช้วิธี CTAB ปฏิกิริยา LAMP ประกอบด้วย 2X Bst buffer, 0.4mM dNTPs, 0.5M Betaine, 0.2µM F3-B3 & FIP-BIP primers, 0.1µM Loop primers, 8 unit Bst polymerase, DNA 50-200 ng ชุดไพรเมอร์ตรวจ CaMV 35S promoter บ่มปฏิกิริยาที่ 60 oC 1 ชั่วโมง และ Nos terminator บ่มปฏิกิริยาที่ 55 oC 2 ชั่วโมง ตรวจผลการเกิดปฏิกิริยาโดยการเติมสาร SYBR
greenI ตัวอย่างที่ตรวจพบยีนพืชดัดแปรพันธุกรรมจะเปลี่ยนจากสีส้มเป็นสีเขียวอมเหลือง ตัวอย่างพืชไม่ดัดแปรพันธุกรรมจะเป็นสีส้มเหมือนเดิม สอดคล้องกับผลตรวจการสังเคราะห์แถบดีเอ็นเอบน 2% Agarose gel electrophoresis
          การตรวจคัดกรองยีน CaMV 35S promoter และ Nos terminator ตัวอย่างวัสดุอ้างอิงมาตรฐานข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมทุกสายพันธุ์ และตัวอย่างพืชสด ให้ผลถูกต้องตรงกับข้อมูลการดัดแปรพันธุกรรมและผลการทดสอบ Real-time PCR ตัวอย่าง Mon810, BT176 ตรวจพบยีน 35S promoter และไม่พบ Nos terminator ตัวอย่าง BT11, NK 603, Mon89034 ตรวจพบยีน 35S promoter และ Nos terminator โดยตัวอย่าง MIR604, MIR162 ตรวจพบ Nos terminator และตรวจไม่พบ 35S promoter ปฏิกิริยา LAMP มีความไวของวิธีทดสอบที่ขีดจำกัด (LOD) <0.04% (NK603 100 ng) สามารถใช้เป็นวิธีตรวจคัดกรองเฝ้าระวังการปนเปื้อนข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมในภาคสนามหรือห้องปฏิบัติการขนาดเล็กได้

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 10 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 30-07-2568

แจ้งไฟล์หาย