คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

ความใช้ได้วิธีการตรวจวิเคราะห์คัดกรองยีน CaMV35S promoter และ Nos terminator ข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมด้วยวิธี Multiplex real-time PCR

คำหลัก :

ผู้วิจัย : ปิยรัตน์ ธรรมกิจวัฒน์

ผู้ร่วมวิจัย : พงศกร สรรค์วิทยากุล, ปิยนุช ศรชัย, ฐิติรัตน์ อัศวมงคลศิริ

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

ปี: 2560

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 29 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          ทดสอบความใช้ได้ของวิธีการตรวจวิเคราะห์คัดกรองยีน Cauliflower Mosaic Virus 35S promoter และ Nos terminator เชิงคุณภาพในข้าวโพดดัดแปลงพันธุกรรมด้วยเทคนิค Multiplex real-time PCR วิธีการดัดแปลงจาก Waiblinger et al. (2008) โดยใช้ไพรเมอร์และโพรบอ้างอิงจาก ISO/IEC21569 : 2005 amd 2013 และ JRC-EURL ตรวจสอบดีเอ็นเอเป้าหมาย CaMV 35S promoter Nos terminator และยีนอ้างอิงพืช (high mobility group; hmg) พร้อมกันในปฏิกิริยาเดียว ผลการทดสอบความใช้ได้ของวิธีพบว่ามีผลการตรวจวิเคราะห์เท่าเทียมหรือดีกว่าวิธีการตรวจแบบทีละยีน (single PCR, simplex) ทุกค่าพารามิเตอร์ที่ตรวจวัดได้อยู่ในเกณฑ์ค่าปกติที่ยอมรับได้ทั้งหมดได้แก่ค่าความเข้มข้นของดีเอ็นเอ 50 - 200 นาโนกรัม มีความจำเพาะในการตรวจยีนโดยไม่พบ false positive/negative ขีดจำกัดการตรวจ (LOD) ที่ 0.001 - 0.01 เปอร์เซ็นต์ PCR efficiency 102 - 115 เปอร์เซ็นต์ (ค่าที่ยอมรับของวิธี multiplex 80 - 120 เปอร์เซ็นต์ Linearity (R2) 0.998 + 0.001 (ค่าที่ยอมรับ R2 > 0.98) และค่า Slope -3.1 ถึง -3.26 (ค่าที่ยอมรับ -3.1 ถึง -3.6) ดังนั้นวิธีการตรวจคัดกรองแบบ multiplex (triplex) Real-time PCR โดยตรวจยีนคัดกรองพืชดัดแปรพันธุกรรม CaMV35S promoter Nos terminator และยีนอ้างอิงข้าวโพด hmg ทำปฏิกิริยาพร้อมกันในหลอดเดียว สามารถใช้เป็นวิธีการตรวจวิเคราะห์ตัวอย่างข้าวโพดดัดแปรพันธุกรรมและผลิตภัณฑ์จากข้าวโพดในเชิงคุณภาพได้

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 11 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 30-07-2568

แจ้งไฟล์หาย