คลังผลงานวิจัย กรมวิชาการเกษตร

รายงานผลงานวิจัยและพัฒนา

การพัฒนาชุดตรวจสอบ ELISA เชิงพาณิชย์เพื่อตรวจโปรตีน CP4EPSPS ของถั่วเหลืองดัดแปรพันธุกรรม

คำหลัก :

ผู้วิจัย : ธีระ ชูแก้ว

ผู้ร่วมวิจัย : ขนิษฐา วงศ์วัฒนารัตน์, พงศกร สรรค์วิทยากุล

หน่วยงาน : สำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

ปี: 2560

ประเภทผลงาน: ผลงานวิจัยเรื่องเต็ม

จำนวนผู้อ่าน: 18 ครั้ง

บทคัดย่อ (Abstract)

          ถั่วเหลืองสายพันธุ์ GTS 40-3-2 ได้รับการตัดต่อยีน CP4EPSPS ทำให้สามารถต้านทานไกลโพเสทซึ่งเป็นสารกำจัดวัชพืช ชุดตรวจสอบ ELISA ที่พัฒนาขึ้นเป็นการตรวจหาโปรตีน CP4EPSPS ด้วยวิธี ELISA ชนิด Plate-trapped antigen direct ELISA (PTA-direct ELISA) โดยศึกษาประสิทธิภาพการติดฉลาก IgG-CP4EPSPS ด้วยเอนไซม์ Alkaline phosphatase (ALP) และ Horseradish peroxidase (HRP) ต่อประสิทธิภาพของการตรวจหาโปรตีน CP4EPSPS ที่ระดับความเข้มข้น 1 - 5 ไมโครกรัม ผลการศึกษาพบว่าเอนไซม์ทั้ง 2 ชนิด สามารถตรวจสอบโปรตีน CP4EPSPS ได้ในระดับต่ำสุด 1 ไมโครกรัม เมื่อเปรียบเทียบความเข้มของสีที่เกิดขึ้น IgG-CP4EPSPS-HRP มีความเข้มของสีที่สังเกตได้ด้วยสายตามากกว่า IgG-CP4EPSPS-ALP การศึกษาอัตราส่วนตัวอย่างต่อชนิดบัฟเฟอร์ที่ใช้ในการสกัดโปรตีน CP4EPSPS พบว่าใช้อัตราส่วนเมล็ดถั่วเหลืองต่อ Extraction buffer 1 : 10 (กรัมต่อมิลลิลิตร) เมื่อตรวจสอบโปรตีน CP4EPSPS โดยใช้ IgG-CP4EPSPS-HRP แล้วเติม TMB สับสเตรท สามารถอ่านและวิเคราะห์ผลการตรวจสอบได้ด้วยสายตาที่ระยะเวลา 30 นาที โดยใช้ระยะเวลาในการตรวจสอบรวมทุกขั้นตอนไม่เกิน 5 ชั่วโมง เมื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพของชุดตรวจสอบ ELISA กับวิธี Real-time PCR พบว่า มีความถูกต้องร้อยละ 70 ผลการทดลองดังกล่าวสามารถพัฒนาเป็นชุดตรวจสอบ ELISA ต้นแบบเชิงพาณิชย์โดยสามารถตรวจได้ 48 ตัวอย่างต่อ 1 ไมโครเพลท (จำนวน 2 ซ้ำต่อตัวอย่าง) เมื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพของชุด ELISA ต้นแบบเชิงพาณิชย์กับวิธี Real-time PCR โดยใช้ตัวอย่างใบและเมล็ดถั่วเหลืองที่สุ่มจากห้องปฏิบัติการและจากแปลงปลูกของเกษตรกรจำนวน 143 ตัวอย่าง พบว่า ชุด ELISA ต้นแบบเชิงพาณิชย์มีความถูกต้องร้อยละ 90

URL Reference :

(ดาวน์โหลด: 10 ครั้ง)

ปรับปรุงข้อมูลเมื่อวันที่ 30-07-2568

แจ้งไฟล์หาย